细胞转染是一种将外源性遗传物质导入目标细胞的技术,在生命科学研究、药物研发及新药开发中具有重要作用。化学转染法是生物技术研究中最常用的方法,其优势在于能够通过控制化学物质浓度、作用时间等来精确控制转染效率及时间。
如何选择转染试剂
选择合适的转染试剂是确保细胞转染实验成功的重要因素。市场上众多转染试剂各具特点,挑选适配的产品至关重要。
1. 根据实验目的
根据实验需求选择稳定转染或瞬时转染。两者步骤相似,但对外源基因的要求不同,稳定转染通常需要具有复制能力的质粒或病毒载体,而瞬时转染则不需要。稳定转染常用脂质体类试剂,细胞通过内吞作用获得转染;瞬时转染则多使用纳米聚合物。
2. 根据细胞种类
不同细胞对转染效率影响显著。例如,HEK293T细胞易于转染且对载体选择性低,因此常用于功能性蛋白和抗体的开发。但在一些肿瘤细胞中,如HepG2、A549等,转染效率较低,给实验带来挑战。此外,贴壁细胞和悬浮细胞在转染方法选择上需求不同,贴壁细胞通常使用脂质体介导,而悬浮细胞更适合聚合物介导的方法。
3. 根据基因种类
转染主要涉及DNA和RNA。DNA转染目的在于导入外源DNA片段,主要用于基因表达;而RNA转染则多用于导入干扰RNA以研究特定基因的功能。不同类型的试剂在转染效果上可能存在差异。
4. 根据转染效果
理想的转染试剂应具有高效转染和低细胞毒性,以确保外源基因导入的同时提高细胞存活率,确保实验结果的可靠性。一些常见转染试剂如脂质体因固有的细胞毒性,可能导致细胞死亡率在15%-30%之间,优质的转染试剂应控制在15%以下。
5. 根据操作简便性
选择操作简便的转染试剂可以显著节约实验时间。操作的简便性包括是否更换培养基、试剂成分数量、孵育方式和时间等。这对多组平行对照条件的实验设计尤为重要。
尊龙凯时转染试剂
尊龙凯时提供多款高效转染试剂,例如1BGPNAM11/BGPNAM11Plus系列,主要由纳米阳离子聚合物构成,易于与负电荷核酸结合,具有超过95%的转染效率,且低细胞毒性确保细胞活率达85%。此外,客户反馈数据表明,其他系列如2LNP30iMate和3LNP60iMate在不同细胞类型中也展现出良好的转染效果和细胞存活率。
实验干货
转染实验中有几个关键因素影响转染效果:
- 抗生素:抗生素对真核细胞通常无毒,但若与阳离子脂质试剂结合,可能影响细胞活性。
- 血清:血清的存在可影响复合物形成,因此在转染时需注意血清的使用量。
- 细胞代数:通用细胞状态要求在1-2次传代后,确保细胞活力。
- 细胞密度:转染时的细胞密度需控制在适当范围,贴壁细胞一般在60%-90%之间。
- 核酸质量:高纯度的核酸更能确保高效转染。
通过合理选择转染试剂和优化实验条件,尊龙凯时将助力您的基因工程研究,确保实验的成功与高效。